激活的GST-tagged AKT2 / PKBbeta。
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贝尔K, Lisinski我Gompert M Stuhlmann D, Schmolz K,克莱因HW, Al-Hasani H
激活的GST-tagged AKT2 / PKBbeta。
Biochim Biophys学报。2005年10月10日,1725 (3):340 - 7。Epub 2005 4月20。
- PubMed ID
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15890450 (在PubMed]
- 文摘
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AKT蛋白激酶是细胞生长的主要监管机构,细胞生存和代谢的胰岛素的行动。然而,体内一种蛋白激酶的激活机制,这可能涉及到膜招聘的激酶,齐聚,和多个磷酸化事件,并不完全理解。在目前的研究中,我们有表达和纯化二聚的GST-fusion蛋白质的蛋白激酶AKT2 (DeltaPH-AKT2)毫克量通过杆状病毒表达系统。治疗病毒感染昆虫细胞与磷酸酶抑制剂冈田酸(OA)导致磷酸化的两个监管磷酸化网站,Thr309 Ser474和激酶的活化。同样,磷酸化的Thr309体外重组的基因或突变Thr309和Ser474呈现酸性残留激酶既定的活跃。然而,尽管我们AKT2的具体活动增加了15倍与先前的报道相比,GST-mediated单独二聚作用并不导致激酶的活化。而诱变和磷酸化导致酶的转换数的增加,只有后者导致明显减少(20倍)明显的外源性底物Crosstide公里值,表明这种广泛使用的诱变只是部分模仿磷酸化。Thr309 GST-AKT2动力学分析表明,磷酸化的激酶的活化循环主要是负责观察到的减少公里和随后的催化效率150倍增加(k (cat) /公里)的酶。高活性AKT2结构被用于体外自身磷酸化反应,在不活跃的AKT2激酶作为底物。事实上,我们发现一个小自身磷酸化AKT2的活动,但没有显著的自身磷酸化的两个监管网站,Thr309或Ser474。