定点诱变的胞质sulfotransferase(饥饿)2 b1b phospho-mimetic Ser348Asp结果在同种型催化活性增加。
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他D,萨尔曼·埃德Runge-Morris M, Kocarek助教,Falany CN
定点诱变的胞质sulfotransferase(饥饿)2 b1b phospho-mimetic Ser348Asp结果在同种型催化活性增加。
J类固醇生物化学杂志。2011;11月127(3 - 5):315 - 23所示。doi: 10.1016 / j.jsbmb.2011.07.010。Epub 2011年8月6日。
- PubMed ID
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21855633 (在PubMed]
- 文摘
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人类SULT2B1b有别于其他饥饿亚型由于独特的氨基酸的存在(N)和羧基末端肽(C)。使用定点诱变,确定磷酸化Ser348与核本地化。调查这种磷酸化的影响Ser348活动和细胞定位,一个在计算机分子模拟产生的变异Ser348 Asp。Asp残渣模仿phospho-Ser和同源性模型的形状和电荷SULT2B1b-phospho-S348和SULT2B1b-S348D建议类似的c端肽的重要结构重排。评估这个翻译修饰的功能结果和预测重排,6 his-sult2b1b-s348d合成、表达、纯化和表征。6 his-sult2b1b-s348d都有一个特定活动脱氢表雄酮硫酸盐化作用十倍高于6 his-sult2b1b重组(209.6和21.8 pmolmin(1)毫克(1),分别)。类似于本机SULT2B1b,凝胶过滤色谱法显示SULT2B1b-S348D为保持酶的活性。稳定性分析比较SULT2B1b和SUL2B1b-S348证明SULT2B1b比SULT2B1b耐热性的少60% - 348 d。增加稳定性和硫酸盐化作用活动允许更好的描述假定的基质以及硫酸盐化作用动力学的离解常数的测定,很难获得与野生型(WT) 6 his-sult2b1b。K (D) s脱氢表雄酮和PAPS绑定6 his-sult2b1b-s348d 650 + / 7海里,265 + / 4海里,分别,而K s (D)为绑定WT酶的底物不能确定。 Characterization of the molecular mimic SULT2B1b-S348D provides a better understanding for the role of the unique structure of SULT2B1b and its effect on sulfation activity, and has allowed for improved kinetic characterization of the SULT2B1b enzyme.