在单个活细胞中可见磷脂酰肌醇3激酶依赖的Bruton酪氨酸激酶pleckstrin同源结构域的膜关联。
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王志刚，王志刚，王志刚
在单个活细胞中可见磷脂酰肌醇3激酶依赖的Bruton酪氨酸激酶pleckstrin同源结构域的膜关联。
《生物化学杂志》1999年4月16日;274(16):10983-9。
- PubMed ID
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10196179 (PubMed视图］
- 摘要
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磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸(PI(3,4,5)P3)已被提出作为第二信使，通过其pleckstrin同源性(PH)域将调节蛋白招募到质膜。布鲁顿酪氨酸激酶(Btk)的PH域在人类疾病x -连锁无γ球蛋白血症中突变，已被证明在体外与PI(3,4,5)P3相互作用。本研究构建了含有Btk的PH结构域和增强型绿色荧光蛋白(BtkPH-GFP)的融合蛋白，并利用该融合蛋白研究了该PH结构域与活细胞内膜肌醇磷脂的相互作用能力。在静止的NIH 3T3细胞中，BtkPH-GFP的定位与单独的GFP难以区分，通过共聚焦显微镜观察，两者都是胞浆性的。在共表达BtkPH-GFP和表皮生长因子受体的NIH 3T3细胞中，表皮生长因子或内源性血小板源性生长因子受体的激活导致胞浆荧光快速(<3分钟)转移到褶状膜结构。这种反应在只表达GFP的细胞中没有观察到，并且被PI - 3激酶抑制剂wortmannin和LY 292004完全抑制。膜靶向的PI 3-kinase也引起了BtkPH-GFP的膜定位，该定位被wortmannin缓慢逆转。当Btk PH结构域的R28C突变(导致x -连锁无γ球蛋白血症)被引入荧光结构物时，刺激后未观察到易位。相反，E41K突变赋予原生Btk转化活性，导致BtkPH-GFP显著的膜定位，其特征表明其可能与PI(4,5)P2结合。该突变体(而非野生型BtkPH-GFP)干扰了激动剂诱导的COS-7细胞PI(4,5)P2水解。 These results show in intact cells that the PH domain of Btk binds selectively to 3-phosphorylated lipids after activation of PI 3-kinase enzymes and that losing such binding ability or specificity results in gross abnormalities in the function of the enzyme. Therefore, the interaction with PI(3,4,5)P3 is likely to be an important determinant of the physiological regulation of Btk and can be utilized to visualize the dynamics and spatiotemporal organization of changes in this phospholipid in living cells.