鼠伤寒沙门氏菌nadC基因序列测定使用Mud-P22和净化的quinolinate phosphoribosyltransferase。
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休斯KT,在全世界,灰色JP, Grubmeyer C
鼠伤寒沙门氏菌nadC基因序列测定使用Mud-P22和净化的quinolinate phosphoribosyltransferase。
J Bacteriol。1993年1月,175 (2):479 - 86。
- PubMed ID
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8419294 (在PubMed]
- 文摘
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鼠伤寒沙门氏菌nadC基因及其产品,喹啉酸phosphoribosyltransferase (QAPRTase),在分子和生化特征水平。融合nadC Mud-lac元素孤立的基因被转换为Mud-P22插入。从六个原始Mud-lac融合,整个nadC基因序列是容易获得的。序列显示了一个长期开放阅读框有两个潜在的发起者蛋氨酸,其中一个是之前Shine-Dalgarno GGAG-7-nucleotide-ATG序列。第二个开放阅读框的蛋白质预测297残留的长度。nadC基因subcloned成T7-based表达系统,允许简单的净化QAPRTase (EC 2.4.2.19)同质性蛋白质。蛋白质在凝胶过滤,给了一个M (r)的72000年,和钠十二烷基sulfate-polyacrylamide凝胶电泳亚基(r)的35000。自动化埃德曼降解的胰蛋白酶的肽证实了DNA序列的氨基酸序列预测。色谱法显然均相酶的反相高效液相色谱法两种蛋白质来解决。其中一个物种未能给出一个伴序列,而另一方产生伴序列预测的第二个开放阅读框和缺乏发起者蛋氨酸。 The mass of the mature protein, predicted from its DNA sequence, was 32,428 Da. Electrospray mass spectrometry gave masses of 32,501 and 32,581 Da for the two peptides. Steady-state kinetics on the purified QAPRTase indicated Km values of 32 microM for 5-phosphoribosyl-1-pyrophosphate and 20 microM for quinolinate. Vmax was 0.9 U/mg, similar to values reported for this enzyme by other sources.