pH-dependent浇注在链霉菌属lividans K +通道。
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Cuello LG,罗梅罗詹,科尔特斯DM Perozo E
pH-dependent浇注在链霉菌属lividans K +通道。
生物化学。1998年3月10日,37 (10):3229 - 36。
- PubMed ID
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9536962 (在PubMed]
- 文摘
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由于其规模,高水平的表达,和不寻常的洗涤剂稳定,小K +通道从链霉菌属lividans (SKC1)被认为是一个理想的候选人详细的结构分析。在本文中,我们使用平面脂质影响和放射性示踪剂吸收实验研究纯化重组SKC1,为了开发一个批量分析的功能特性。在渠道重组成脂质体与外部pH值3.5和intravesicular pH值7.5,一个依赖于时间的观察SKC1-catalyzed 86 rb +吸收。阳离子涌入被菲律宾媒体+离子Ki(外部)为0.4毫米,被证明有以下选择性序列:K + > Rb + > > > NH4 + Na + >李+。在实验与外部pH值7.5或脂质体不含频道,没有检测到86 rb +吸收。SKC1纳入平面脂质影响的时候,我们没有观察到显著的单通道活动中性pH值但发现频繁的多通道开口pH值< 5.0。这些结果表明,在这些实验条件下SKC1的行为作为一个pH-gated K +通道的质子化作用促进一个或多个残留通道开放。酸性pH值和对称的200毫米氯化钾溶液,SKC1显示许多短暂的开口135 pS的主要单通道电导和subconductance 70 pS。通道开放概率出现了轻微的电压依赖性,观察到负电位较高的活动,事实上这可能表明,质子化作用在跨膜电场。试图确定通道的pKa激活被内在的限制86 rb +通量测定。然而,它似乎是pH值低于4.0。 Limited proteolysis experiments demonstrated that SKC1 reconstitutes vectorially, almost exclusively in the right-side-out configuration, indicating that the protonation site responsible for channel opening is located at the extracellular face of the channel. These results point toward a potentially novel gating mechanism for SKC1 and open the possibility of using transmembrane-driven radiotracer influx experiments as a reliable bulk functional assay for reconstituted SKC1.