催化循环beta-phosphoglucomutase:动能和结构分析。
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王戴张G J, L, Dunaway-Mariano D, Tremblay LW,艾伦KN
催化循环beta-phosphoglucomutase:动能和结构分析。
生物化学。2005年7月12日,44 (27):9404 - 16。
- PubMed ID
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15996095 (在PubMed]
- 文摘
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Lactococcus lactis beta-phosphoglucomutase (beta-PGM)催化的互变现象beta-d-glucose 1-phosphate (beta-G1P)和beta-d-glucose 6-phosphate (G6P),形成beta-d-glucose 1, 6 -磷酸(bis) (beta-G16P)作为中间。Beta-PGM保存的核心域催化脚手架的磷酸酶分支(haloalkanoic酸dehalogenase)酶总科,但它已经进化到函数作为变位酶而非磷酸酶。这项工作进行了识别结构基础的底层这种多样化的功能。在本文中,我们检查beta-PGM镁(2 +)辅因子激活,beta-PGM Asp8磷酸化,激活和帽的作用域关闭在衬底的歧视。首先,1.90毫克的分辨率x射线晶体结构(2 +)-beta-PGM复杂检查之前报道中结构的镁(2 +)-alpha-d-galactose-1-phosphate-beta-PGM、镁(2 +)-phospho-beta-PGM,镁(2 +)-beta-glucose-6-phosphate-1-phosphorane-beta-PGM复合物来识别过程发生构象变化的催化营业额。Asp8重要作用的证实了亲核催化证明D8A和D8E突变体没有催化活性。比较镁(2 +)的配体在不同的复合物显示一个毫克(2 +)协调网站必须或者容纳水,磷酸,在催化营业额正膦中间。有限参与的家庭metal-binding循环毫克(2 +)锚定在beta-PGM符合相对宽松绑定表示大K (m)的镁(2 +)激活(270 + / - 20 microM)和保留的活动中发现E169A / D170A双重循环变异。比较帽和核心领域的相对位置不同复合物显示交互的帽域Arg49“nontransferring”磷酰基的基质配体可能稳定控油构象,活跃的站点去溶剂化和所需的对齐Asp10酸碱催化。动力学分析的特异性beta-PGM对磷酰基集团捐赠者和对磷酰基phospho-beta-PGM集团的特异性受体。 The results support a substrate induced-fit mechanism of beta-PGM catalysis, which allows phosphomutase activity to dominate over the intrinsic phosphatase activity. Last, we present evidence that the autophosphorylation of beta-PGM by the substrate beta-G1P accounts for the origin of phospho-beta-PGM in the cell.