结构决定因素的分析潜在的歧视在beta-phosphoglucomutase催化底物和溶剂之间。
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张戴J, Finci L, C, Lahiri年代,张G, Peisach E,艾伦KN, Dunaway-Mariano D
结构决定因素的分析潜在的歧视在beta-phosphoglucomutase催化底物和溶剂之间。
生物化学。2009年3月10日,48 (9):1984 - 95。doi: 10.1021 / bi801653r。
- PubMed ID
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19154134 (在PubMed]
- 文摘
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Tauhe beta-phosphoglucomutase (beta-PGM) haloacid dehalogenase酶总科(HADSF)催化转换奶1-phosphate到(betaG1P)葡萄糖- 6 -磷酸(G6P)使用Asp8核心领域活跃的站点调解磷酰基转移从奶1,6 -磷酸(bis) betaG1P (betaG1 6 bisp)。在此,我们探索的机制的水解beta-PGM phospho-Asp8期间避免活性部位必须保持开放的时间溶剂允许绑定产品的交换与衬底betaG1P G6P。结构信息的基础上,提出了催化模型的一般的酸/碱(Asp10)侧链从一个位置形成的氢键Thr16-Ala17部分domain-domain链接器的功能位置形成的氢键衬底离去基团O和一双His20-Lys76帽域。重新定位的核心领域内的一般的酸/碱活性部位是配合substrate-induced关闭帽域的核心领域。所需的模型预测,Asp10一般酸/碱催化和控油的稳定酶的构象。它还预测,铰链Thr16残留在生产中扮演着重要角色domain-domain协会Thr16氢键相互作用的骨干酰胺NH集团需要防止phospho-Asp8水解cap-open构象,而His20-Lys76扮演着一个重要的角色在substrate-induced帽闭包。通过动力学分析模型研究了Asp10, Thr16, His20, Lys76基因定点突变体。更换Asp10阿拉巴马州,爵士,半胱氨酸,Asn, Glu导致没有可观察到的活动。更换链接器的动力学后果残渣Thr16与Pro包括betaG1 Asp8磷酸化率减少,6 bisp,减少的速度骑自行车的磷酸化酶转换betaG1P G6P,和一个增强的速度从phospho-Asp8磷酰基转移到水。T16P突变体的x射线晶体结构分辨率2.7提供了一个快照在非自然的cap-open酶构象的Asp10侧链位于核心域活性部位。 The His20 and Lys76 site-directed mutants exhibit reduced activity in catalysis of the Asp8-mediated phosphoryl transfer between betaG1,6bisP and betaG1P but no reduction in the rate of phospho-Asp8 hydrolysis. Taken together, the results support a substrate induced-fit model of catalysis in which betaG1P binding to the core domain facilitates recruitment of the general acid/base Asp10 to the catalytic site and induces cap closure.