活性位点突变体的快速屏幕甘氨酰胺核苷酸transformylase。
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沃伦女士,Marolewski AE Benkovic SJ
活性位点突变体的快速屏幕甘氨酰胺核苷酸transformylase。
生物化学。1996年7月9日,35 (27):8855 - 62。
- PubMed ID
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8688421 (在PubMed]
- 文摘
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具体和饱和度定点mutageneses被用来改变每一个极地残留在6催化中心的甘氨酰胺核苷酸transformylase (EC 2.1.2.2)。这些突变体对催化活性快速筛选使用营养缺陷型的细胞的功能互补。这个屏幕允许快速定性的估计为每个这些突变体酶活性。这些结果表明,没有一个接近极地残留酶的催化中心是不可替代的,尽管一些重要的催化活性,即Asn106, His108 Ser135, Asp144。的机制提出了一个固定的水分子介导所需的质子转移衬底和辅因子之间,虽然甲酰集团从10-formyltetrahydrofolate直接胺亲核攻击的甘氨酰胺核苷酸。极地残留活性位点可能改变攻击,而氨基酸组的pKa值在一个假定的四面体中间为了方便甲酰集团的转移。