82年保守的色氨酸的角色干酪乳杆菌thymidylate合成酶。
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Kealey厚颜JT, Eckstein J,桑蒂DV
82年保守的色氨酸的角色干酪乳杆菌thymidylate合成酶。
化学杂志。1995年9月,2 (9):609 - 14。
- PubMed ID
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9383465 (在PubMed]
- 文摘
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背景:Thymidylate合成酶(TS;EC 2.1.1.45)催化的还原甲基化2“-deoxyuridine-5”一磷酸(垃圾场)5,10-methylene-5, 6, 7, 8-tetrahydrofolate (CH2H4folate)生产2“-deoxythymidine-5”一磷酸(dTMP)和7,8-dihydrofolate (H2folate)。TS的机理的主要研究进展的了解已经通过研究特定站点酶的突变体。Trp82完全守恒在所有的20 TS序列。它形成CH2H4folate绑定的口袋里的一部分,据报道,催化地重要H-bond网络的一个组成部分,并怀疑是一个不寻常的吸光度变化的来源在TS 330海里形成三元复杂5-fluoro-dTMP和CH2H4folate。因此我们准备和一组12个特征突变体在82位置的干酪乳杆菌TS。结果:八Trp82突变体活性足以让我们来确定他们的动力学常数dTMP生产,而四人不活跃。活性突变体有更高的Km值转储(2 - 10倍)和CH2H4folate(2 - 26倍),并降低kcat值(12 - 250倍)比野生型TS。最活跃的突变体是那些含有芳香族侧链板式换热器和他在82的位置。所有的Trp82突变体催化的脱溴5-bromo-dUMP与动力学参数与野生型相似的TS,和所有形成三元复合物5-fluoro-dUMP和CH2H4folate。没有Trp82并没有阻止吸光度变化在330 nm三元复杂的形成。结论:Trp82完全守恒的残渣,显示了x射线晶体学互动与CH2H4folate直接和间接地转储,似乎没有绑定或催化作用的必要条件。 We do, however, find a preference for an aromatic side chain at position 82. Trp82 does not contribute to the unique spectral change at 330 nm that accompanies TS ternary complex formation.