膜蛋白的提取微分溶解使用二维凝胶电泳分离。
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莫雷MP,赫伯特BR,沃尔什BJ,泰勒小姐,Traini M,桑切斯JC, Hochstrasser DF,威廉姆斯KL·古利AA
膜蛋白的提取微分溶解使用二维凝胶电泳分离。
电泳。1998年5月,19 (5):837 - 44。
- PubMed ID
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9629924 (在PubMed]
- 文摘
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我们描述膜蛋白的提取和浓缩分离的二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2 - d页面)微分溶解后的大肠杆菌细胞溶解产物。在一个简单的三步连续溶解协议适用于完整的细胞溶解产物,膜蛋白从其他细胞蛋白质的不溶性分区解决方案通常用于等电点聚焦(IEF)。作为第一步,Tris-base是用来溶解许多胞质蛋白。合成颗粒又受到传统增溶的解决方案(尿素、3 - [(3-cholamidopropyl) dimethylammonio] 1-propanesulfonate,二硫苏糖醇,三,载体两性电解质)。完成这一步后,89%的初始大肠杆菌样本质量是可溶性的。最后,膜蛋白丰富的颗粒部分可溶性使用尿素、硫脲、三丁基膦和多个两性离子表面活性剂。使用n端序列标记和肽质量指纹我们已经确定11从这个颗粒膜蛋白。两个外膜蛋白(Omp), OmpW OmpX,以前一直只知道作为一个开放阅读框在大肠杆菌,而OmpC、施行和OmpTOLC以前没有发现二维凝胶。整个细胞溶解产物的初步分离成多个分数,根据溶解度,导致蛋白质模式简化二维页面使用广泛的pH值3.5 -10年固定化后pH梯度(IPGs)。额外的样品初步分离的优点是蛋白质识别和凝胶匹配,数据库建设,是一个更易于管理的任务,这个过程不需要专门的设备,顺序提取是进行一个离心管,减少蛋白质的损失。