大肠杆菌的定点诱变acetylglutamate激酶的催化和substrate-binding机制和第三天冬氨酸激酶调查这些氨基酸激酶家族酶和允许天冬氨酸激酶的三维造型。
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Marco-Marin C, Ramon-Maiques年代,Tavarez年代,卢比奥V
大肠杆菌的定点诱变acetylglutamate激酶的催化和substrate-binding机制和第三天冬氨酸激酶调查这些氨基酸激酶家族酶和允许天冬氨酸激酶的三维造型。
J杂志。2003年11月28日,334 (3):459 - 76。
- PubMed ID
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14623187 (在PubMed]
- 文摘
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我们测试,使用定点诱变,预测基于x射线结构N-acetyl-L-glutamate激酶(NAGK),氨基酸激酶蛋白家族的范式,对底物特定角色的残留绑定和催化作用。突变K8R和D162E减少V ([sustrate] =无穷大)100倍和1000倍,与预测,分别在协议K8催化磷酰基转移和D162组织催化组。R66K N158Q增加选择性K (m) (Asp) 3到4个数量级,在协议的绑定R66和N158 C(α)取代基的唠叨。诱变并行的第三天冬氨酸激酶(AKIII磷酸化天冬氨酸盐而不是acetylglutamate),另一个重要的氨基酸激酶家族成员的未知的三维结构,确定在AKIII两残留物,K8、D202出现扮演的角色类似于K8、NAGK D162和支持的介入E119 R198,类似于R66 N158 NAGK,绑定的氨基酸衬底,显然是相互作用,分别与alpha-NH(3)(+)和alpha-COO天冬氨酸(-)。这些结果和改进的对齐NAGK和AKIII序列的引导我们进入3 d造型AKIII氨基酸激酶结构域的使用NAGK作为模板。该模型具有良好的立体化学和验证参数。它提供了洞察衬底绑定和催化,同意诱变结果与另一个天冬氨酸激酶,建设时没有考虑模型。由赖氨酸AKIII homodimeric并抑制。赖氨酸可以绑定到一个监管区域,c端氨基酸激酶结构域。我们制造一个c端截断AKIII (AKIIIt)和显示恒定区参与intersubunit交互,因为AKIIIt单体的。此外,它是不活跃的,要求如果二聚体的形成是必不可少的活动。 Models for AKIII architecture are proposed that account for these findings.