识别两个半胱氨酸残基形成一对附近的硫醇glucosamine-6-phosphate脱氨酶的大肠杆菌和定点诱变的功能作用的研究。
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Altamirano MM, Plumbridge是的,Calcagno毫升
识别两个半胱氨酸残基形成一对附近的硫醇glucosamine-6-phosphate脱氨酶的大肠杆菌和定点诱变的功能作用的研究。
生物化学。1992年2月4日,31 (4):1153 - 8。
- PubMed ID
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1734962 (在PubMed]
- 文摘
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nagB基因在大肠杆菌的核苷酸序列,编码glucosamine-6-phosphate脱氨酶,位于四个半胱氨酰残基位置118,219,228,239。化学改性进行了纯化酶的研究表明,这些残留物形成的含巯基的两组附近的一对酶和硫醇试剂很容易修改。变构过渡到更积极的构象异构体(R),由正合的绑定(D-glucosamine 6-phosphate或2-deoxy-2-amino-D-glucitol 6-phosphate)或斜交的(N-acetyl-D-glucosamine 6-phosphate)配体,完全保护这些硫醇化学改性。选择性的cyanylation附近的硫醇与2-nitro-5 -苯甲酸(thiocyanato),其次是碱性水解改性半胱氨酸生产链条乳沟,给了多肽的模式允许我们识别Cys118和Cys239残留形成硫醇。随后,三个基因的突变形式是由oligonucleotide-directed诱变,其中一个或两个半胱氨酸密码子改变了丝氨酸。突变体蛋白过表达和纯化,及其动力学进行了研究。形成的二硫酚Cys118 Cys239是必要的,最大的催化活性。单取代和双突变影响催化效率以类似的方式,也是一样的效果的化学块硫醇。然而,只有其中一个半胱氨酰残基,Cys239,变构过渡的重要作用,及其对丝氨酸替代降低了变构相互作用能,由于较低的KT的价值。