白三烯A4水解酶:确定三个定点诱变和锌锌结合配体的分析。
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白三烯A4水解酶:确定三个定点诱变和锌锌结合配体的分析。
《美国国家科学院刊a . 1991 9月1;88 (17):7620 - 4。
- PubMed ID
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1881903 (在PubMed]
- 文摘
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三个突变体的重组鼠标白三烯A4 (LTA4)水解酶(3.3.2.6)是由定点诱变的互补。相对应的密码子- 295,- 299,或glu - 318取而代之的是密码子编码酪氨酸,酪氨酸,分别和谷氨酰胺。变异的互补在大肠杆菌表达,和三个突变蛋白纯化明显的同质性。这些突变体中含有大量的锌,由原子吸收光谱法,所有人都几乎没有LTA4水解酶、肽酶酶的活动。然而,他们发现的突变蛋白可以积极人力LTA4水解酶与抗血清免疫反应性免疫印迹分析。进行定点诱变也是人类LTA4水解酶互补脱氧核糖核酸。密码子编码- 295,- 299,和glu - 318取而代之的是编码酪氨酸,亮氨酸,丙氨酸,分别和三个突变体在大肠杆菌表达。LTA4水解酶活动的总可溶性蛋白生产的这些表达式的不到10%,获得了窝藏细菌不变异的互补。同意早前的预测,我们的实验数据表明,- 295,- 299,glu - 318构成的三个配体固有的锌原子LTA4水解酶。此外,合并后的酶活性和锌含量的损失纯化突变小鼠蛋白质,强调的锌原子催化的关键作用,而突变的几乎相同的色谱行为,不变异老鼠LTA4水解酶蛋白质表明金属有限酶三级结构维护的重要性。