白三烯A4水解酶:废除肽酶活性的突变的谷氨酸- 296。
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Wetterholm,麦地那摩根富林明,Radmark啊,夏皮罗R, Haeggstrom生理改变,法兰提单,萨缪尔森B
白三烯A4水解酶:废除肽酶活性的突变的谷氨酸- 296。
《美国国家科学院刊S a . 1992年10月1日;89 (19):9141 - 5。
- PubMed ID
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1357660 (在PubMed]
- 文摘
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的序列中的主题与白三烯A4 (LTA4) (EC 3.3.2.6),双官能团的锌金属酶,含有谷氨酸在几个锌水解酶是守恒的。研究它的作用两个催化活动,glu - 296鼠标白三烯A4水解酶谷氨酰胺或丙氨酸残基所取代了定点诱变。野生型和突变的互补在大肠杆菌表达了四五次,和由此产生的蛋白质纯化明显的同质性。环氧化物水解酶对他们的活动——即。,LTA4转化为白三烯B4 -突变酶[Gln296] LTA4水解酶和[Ala296] LTA4水解酶表现出特定活动的1070 + / - 160和90 + / - 30 nmol LTB4每分钟每毫克的蛋白质(意思是+ / - SD;n = 4或5),分别对应于不突变酶的150%和15%。相比之下,变异的蛋白质化验时向alanine-4-nitroanilide肽酶活动,他们发现几乎不活跃的(小于或等于0.2%的不突变酶)。作为一个积极的控制,我们也取代ser - 298丙氨酸残基,导致蛋白质([Ala298] LTA4水解酶)与催化性能几乎与野生型酶。替换glu - 296通过谷氨酰胺或丙氨酸也与人类进行LTA4水解酶,和变异的人类酶显示特定的活动类似于相应的鼠标蛋白质。锌的分析纯化小鼠和人类蛋白质证实,突变没有显著影响其锌含量。 In conclusion, the results of the present study indicate a direct catalytic role for Glu-296 in the peptidase reaction of LTA4 hydrolase, where it presumably acts as a base to polarize water, whereas its function, if any, is apparently not essential in the epoxide hydrolase reaction.