光亲和标记的人类胎盘与[2-3H] 8-azido-adenosine S-adenosylhomocysteine水解酶。
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博查特元CS, RT
光亲和标记的人类胎盘与[2-3H] 8-azido-adenosine S-adenosylhomocysteine水解酶。
生物化学杂志。1995年7月7日;270 (27):16140 - 6。
- PubMed ID
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7608178 (在PubMed]
- 文摘
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潜在的光亲和探针8-azido-adenosine (8-N3-Ado)作为底物的3所示的氧化活性的人类S-adenosylhomocysteine (AdoHcy)水解酶(艾亚尔,v . N。学生物化学,Hershfield m . s . (1985)。232年,643 - 650)。在这项研究中,我们已经确定的平衡绑定属性与AdoHcy 8-N3-Ado水解酶(NAD +形式)和识别特定的氨基酸残基共价修改。辐照后的反应混合物2-3H 8-N3-Ado和AdoHcy水解酶(NAD +形式),其次是胰蛋白酶的消化、肽特别photolabeled [2-3H] 3 ' -keto-8-N3-Ado被有效分离肽是非标以[2-3H] 8-N3-Ado使用boronate亲和色谱法。净化后的反相高效液相色谱法,两个photolabeled肽被孤立和确认为Val175-Lys186 Val319-Arg327, Ala177和Ile321与辐射有关。光亲和标记的特异性与[2-3H] 3 ' -keto-8-N3-Ado被观察了这些photolabeled肽不是孤立的[2-3H] 8-N3-Ado孵化时apo AdoHcy水解酶和辐照。两个photolabeled肽的假定为部分adenine-binding域为基质。他们都是在保守区域AdoHcy化水解酶。肽Val175-Lys186位于Cys195和Glu197非常接近。Ser198,这两个被指出是位于酶的活性部位的化学改性和有限的蛋白水解作用的方法。 The peptide Val319-Arg327 is adjacent to Leu330, which is proposed by a computer graphics model to interact with the C-6-NH2 group of Ado.