嗜热硬脂芽孢杆菌NS1122A耐热型胞氨酸酶:酶基因的克隆、测序、高表达及表达酶的一些性质
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木原Y石川T渡边K中村H
嗜热硬脂芽孢杆菌NS1122A耐热型胞氨酸酶:酶基因的克隆、测序、高表达及表达酶的一些性质
生物科学。1994年9月;58(9):1621-6。
- PubMed ID
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7765480 (PubMed视图］
- 摘要
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从大肠杆菌中嗜热的硬脂嗜热芽孢杆菌NS1122A中克隆了一个含有耐热性胞氨酶基因的DNA片段。核苷酸测序结果显示，该DNA片段包含一个开放的阅读框，预计编码471个氨基酸的肽段，计算分子量为51724。在lpp启动子和lac启动子操作子共同控制下，用异丙基-1-硫代- β - d -半乳糖吡喃苷诱导表达时，其在大肠杆菌中过表达，形成不溶性聚集物。该酶从不溶性聚集物中纯化至均质。经凝胶过滤，纯化的活性酶的分子质量约为200 kDa。虽然单体没有活性，但在pH为8.1时，经Mn2+或Co2+孵育后活性恢复。这些结果表明，海氨酸酶是一种金属酶，低聚结构是活性所必需的。低聚物结构被认为有助于热稳定性。