随机诱变的保利(ADP-ribose)聚合酶催化域显示氨基酸参与聚合物分支。
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Rolli V,奥法雷尔M, Menissier-de穆尔西亚J·德·穆尔西亚G
随机诱变的保利(ADP-ribose)聚合酶催化域显示氨基酸参与聚合物分支。
生物化学。1997年10月7日,36 (40):12147 - 54。
- PubMed ID
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9315851 (在PubMed]
- 文摘
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保利(ADP-ribose)聚合酶(PARP)是一种多功能核锌指蛋白参与哺乳动物细胞的直接响应DNA损伤因子。鉴于保利(ADP-ribosylation)反应的复杂性,我们开发了一个大规模的筛选过程在大肠杆菌识别随机氨基酸参与这种机制的各个方面。随机突变产生的聚合酶链反应在cDNA序列覆盖大部分的催化域。26个字母的突变,多样化的灭活全身PARP, 22日被发现在守恒的位置在主结构,和24都位于两个β折叠形成的核心领域包含活性部位。大部分的PARP突变体在保利(ADP-ribose)改变伸长和/或分支。一些残留的空间距离参与链伸长(E988)和分支(Y986)表明这两个催化网站接近或叠加。其他残留影响分支位于分子的表面(R847, E923 G972),表明蛋白质接触对于优化聚合物分支是必要的。这个筛选过程提供了一种简单而有效的方法来进一步探索酶的结构关系。