大肠杆菌的定点诱变鸟氨酸transcarbamoylase:在衬底arginine-57绑定和催化的作用。
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李郭LC,米勒啊,年代,Kozuma C
大肠杆菌的定点诱变鸟氨酸transcarbamoylase:在衬底arginine-57绑定和催化的作用。
生物化学。1988年11月29日,27日(24):8823 - 32。
- PubMed ID
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3072022 (在PubMed]
- 文摘
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carbamoyl-transfer反应催化的鸟氨酸transcarbamoylase,精氨酸残基的活性部位大肠杆菌酶已经建议将磷酸盐基质[氨基甲酰磷酸的一部分。与特定场地诱变的应用,最可能的精氨酸残基之间的结合位点的三位候选人[氨基甲酰磷酸,Arg-57,取而代之的是甘氨酸。结果Gly-57突变体酶是催化大大效率低下。合成L-citrulline从[氨基甲酰磷酸和L-ornithine无机磷酸盐的释放,突变是21000倍的流动率低于野生型。然而,适度Arg-57只影响绑定的突变[氨基甲酰磷酸;这种基质的离解常数,测量稳态流动条件下,从0.046增加到3.2毫米的突变。另一方面,鸟氨酸绑定是显著影响估计的变化模拟L-norvaline离解常数。L-norvaline离解常数的增加约500倍54 microM 25毫米的野生型突变体。自从Arg-57预计将远端网站鸟氨酸和氨基酸(鸟氨酸和戊氨酸)结合只有在野生型反应[氨基甲酰磷酸后,穷人戊氨酸亲和力变异表明,Arg-57参与交互必不可少的生产的氨基酸。这个解释是由不同的紫外吸收光谱表明,构象变化引起的野生型[氨基甲酰磷酸是没有约束力的,突变体。 Furthermore, steady-state kinetic data reveal that the ordered binding mechanism of the wild-type enzyme is transformed into a random binding mechanism in the mutant. Thus, the presence of carbamoyl phosphate in the mutant active site is no longer a requisite for ornithine binding. In the 5-50 degrees C temperature range, transcarbamoylation catalyzed by either the wild type or the mutant observes the Arrhenius rate law with almost identical enthalpies of activation, 11 and 10 kcal/mol, respectively. The entropy of activation is -5.5 eu for the wild-type reaction and -29 eu for the mutant reaction, accounting for a loss of 6-7 kcal/mol in the rate-determining step of the enzymic reaction.(ABSTRACT TRUNCATED AT 400 WORDS)