探索的催化机理GDP-4-keto-6-deoxy-d-mannose差向异构酶/还原酶位点突变体的动力学和晶体特性。
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Rosano C, Bisso Izzo G, Tonetti M,二L,德植物,Bolognesi M
探索的催化机理GDP-4-keto-6-deoxy-d-mannose差向异构酶/还原酶位点突变体的动力学和晶体特性。
J杂志。2000年10月13日,303 (1):77 - 91。
- PubMed ID
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11021971 (在PubMed]
- 文摘
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GDP-4-keto-6-deoxy-d-mannose差向异构酶/还原酶是一种双功能酶负责GDP-l-fucose生物合成的最后一步,fucosyl的衬底转移酶。几个细胞表面抗原,包括白细胞刘易斯系统和细胞表面抗原在病原菌,依赖于可用性GDP-l-fucose的表达式。因此,这种酶是一个潜在的治疗目标在病理状态取决于selectin-mediated细胞间的相互作用。之前的晶体的调查表明,GDP-4-keto-6-deoxy-d-mannose差向异构酶/还原酶属于短链脱氢酶/还原酶蛋白同源性的家庭。接口的酶活性位点区域是一个c端氨基端NADPH-binding域和域,结合底物。的设计、表达和功能描述7个位点突变形式的GDP-4-keto-6-deoxy-d-mannose差向异构酶/还原酶报告在这里。同时,本地全酶的晶体结构和三个突变体(Ser107Ala, Tyr136Glu和Lys140Arg)一直在调查和精炼1。45 - 1.60决议,基于同步数据(r个因子介于12.6%和13.9%之间)。精制蛋白质模型表明,除了活性部位残留Ser107 Tyr136 Lys140,其突变损害总体酶活性和可能影响辅酶绑定模式下,侧链质子交换的能力,坐落在预期的衬底(GDP-4-keto-6-deoxy-d-mannose)绑定的口袋里,有选择地需要在差向异构化作用和还原的步骤。其中,Cys109 His179可能扮演一个主要角色在质子交换酶和异构催化中间体。 Finally, the additional role of mutated active-site residues involved in substrate recognition and in enzyme stability has been analyzed.