Immunoaffinity净化和功能特征的人类转录因子颅内高压症和RNA聚合酶II克隆细胞系,有条件地表达epitope-tagged multiprotein复合物的子单元。
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吴Kershnar E, SY,蒋介石厘米
Immunoaffinity净化和功能特征的人类转录因子颅内高压症和RNA聚合酶II克隆细胞系,有条件地表达epitope-tagged multiprotein复合物的子单元。
生物化学杂志。1998年12月18日;273(51):34444 - 53年。
- PubMed ID
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9852112 (在PubMed]
- 文摘
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净化multiprotein复合物,如转录因子(TF)颅内高压症和RNA聚合酶II (pol II)是一个单调乏味的任务由传统的色谱法。促进净化,我们已经开发出一个有效的方案,允许人类TFIIH和波尔二世隔绝HeLa-derived细胞系,有条件地表达FLAG-tagged p62单元人力TFIIH和人类波尔的RPB9亚基二世。的近似2000倍浓缩FLAG-tagged TFIIH和总额的1000倍增强波尔II是通过一步immunoaffinity净化。纯化复合物在调停基底和转录激活功能,无论tata结合蛋白质或TFIID用作tata结合的因素。有趣的是,镇压基底积极辅因子转录的PC4被越来越多的TFIID缓解,TFIIH,和波尔II全酶,这表明这些蛋白质磷酸化的PC4可能导致结构的构象变化PC4允许始发前复杂的形成和转录的起始。此外,波尔II复合物与羧基末端上的不同的磷酸化状态域最大的单元从诱导选择性纯化波尔II细胞系,从而能够解剖羧基末端的作用域在转录过程中磷酸化体外转录系统定义在一个高度。