绿色小单孢菌神经氨酸酶基因在链霉菌中的克隆、表达及特性研究。
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樱田K，太田T，长谷川M
绿色小单孢菌神经氨酸酶基因在链霉菌中的克隆、表达及特性研究。
中华微生物学杂志，1992.11;27(2):344 - 344。
- PubMed ID
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1400240 (PubMed视图］
- 摘要
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我们克隆了绿链霉菌小单孢菌神经氨酸酶(EC 3.2.1.18)基因(nedA)。这是利用在S. lividans中构建的M. viridifaciens染色体插入物载体pIJ702和BglII-BclI文库完成的。通过监测含氟神经氨酸酶底物2’-(4-甲基伞形基)- α - d -n -乙酰神经氨酸的裂解来筛选神经氨酸酶的表达。阳性克隆(BG6、BG7、BC4和BC8)含有相同的2 kb BclI-BglII片段，并在异源宿主中有效地表达神经氨酸酶，并使用其自身的启动子。从核苷酸序列分析中，发现了一个1941 bp的开放阅读框，编码了一个M(r)为68840的多肽。推导出的氨基酸序列有5个Asp盒，-Ser-X-Asp-X-Gly-X-Thr-Trp，与其他细菌和病毒神经氨酸酶有很大的相似性。我们还利用S. lividans中产生的截断蛋白鉴定了催化结构域。