大肠杆菌的表达、纯化和表征dihydrodipicolinate还原酶。
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Reddy SG, Sacchettini JC,布兰查德JS
大肠杆菌的表达、纯化和表征dihydrodipicolinate还原酶。
生物化学。1995年3月21日,34 (11):3492 - 501。
- PubMed ID
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7893644 (在PubMed]
- 文摘
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Dihydrodipicolinate还原酶催化的NAD (P) H-dependent还原碳碳双键的α,beta-unsaturated环状亚胺Dihydrodipicolinate形成环状亚胺tetrahydrodipicolinate。酶是细菌生物合成途径形成的一个组成部分,赖氨酸和diaminopimelate L-aspartate。dihydrodipicolinate还原酶的基因编码,dapB,已经从大肠杆菌克隆和测序(Bouvier et al ., 1984),和我们使用这个序列信息生成一个包含dapB基因的表达载体。dihydrodipicolinate还原酶的表达和纯化同质性允许我们描述动力学,酶反应的立体化学,化学机制。动力机制是命令,减少核苷酸绑定前dihydrodipicolinate绑定和大概tetrahydrodipicolinate游离氧化前核苷酸释放。酶具有独特的核苷酸特异性,NADH是两倍有效NADPH作为还原剂。酶催化的立体定向传输4 r氢原子的核苷酸,氢化物离子,dihydrodipicolinate 4的位置。这些结果让我们所催化的化学反应机制提出一个dihydrodipicolinate氢化还原酶涉及转移的β碳不饱和亚胺。的共轭C3上负碳离子质子化了的生成减少产品,tetrahydrodipicolinate。