一个氨基酸替换对大肠杆菌的影响二氢叶酸还原酶催化和配体绑定。
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Baccanari DP,石头D, L。﹕
一个氨基酸替换对大肠杆菌的影响二氢叶酸还原酶催化和配体绑定。
生物化学杂志。1981年2月25日,256 (4):1738 - 47。
- PubMed ID
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7007370 (在PubMed]
- 文摘
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二氢叶酸还原酶的两个同功酶(表格1和2),一个Trimethoprim-resistant株大肠杆菌(RT500)分离和纯化同质性使用一个简单的基于微分过程从甲氨蝶呤亲和柱洗脱。完整的表单2同工酶氨基酸序列决定,它不同于形式1只在一个位置。残留28表格2中精氨酸和亮氨酸在表格1中。然而,同功酶有很大的不同在他们的绑定和动态属性。平衡透析研究显示表单2约50倍的甲氧苄氨嘧啶离解常数大于1的形式在复杂二元和三元复杂NADPH。同样,甲氨蝶呤离解常数的形式2是大约10倍比的形式1。两国同功酶还营业额数字在不同pH值7 10倍更活跃(表格1)和二价阳离子的抑制。形式1是极其敏感的氯化钡(抑制50%至0.5毫米),而形式2是不太敏感(50%抑制60毫米)。在10毫米氯化钡,形成1形式的功能特征2。其转化率降低,甲氧苄氨嘧啶Ki增加,pH-activity剖面的形状是2相同的形式。 The x-ray structures and amino acid sequences of several bacterial dihydrofolate reductases indicate that Asp-27 is important in inhibitor binding and may be involved in catalysis. The present data provide kinetic evidence for this hypothesis, and it is proposed that almost all the unusual characteristics of Form 2 are the direct result of a charge interaction between Arg-28 and Asp-27. A similar interaction between Ba2+ and the Asp-27 of Form 1 can result in an enzyme complex that is kinetically similar to Form 2.