演化设计活跃半胱氨酸,methionine-free大肠杆菌二氢叶酸还原酶的突变体。
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Iwakura M, Maki K,高桥H, Takenawa T,横田,Katayanagi K, Kamiyama T,盖柯K
演化设计活跃半胱氨酸,methionine-free大肠杆菌二氢叶酸还原酶的突变体。
生物化学杂志。2006年5月12日;281(19):13234 - 46所示。Epub 2006 3月1。
- PubMed ID
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16510443 (在PubMed]
- 文摘
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我们开发了一个策略,发现酶的适应变异,我们应用一种酶,二氢叶酸还原酶(DHFR)的催化活性,这样我们成功获得几个活跃的半胱氨酸和methionine-free变异的DHFR五methionyl和两个半胱氨酰残基被其他氨基酸残基所取代。其中,一种变体(M1A / M16N / M20L / M42Y C85A / M92F / C152S),命名为ANLYF,有大约七倍比野生型DHFR k(猫)值。酶动力学和晶体结构的变异进行了阐明多动症的机制。变体的稳态和瞬态绑定动力学表明,催化循环的动力方案ANLYF野生型的本质上是一样的,显示的增加所带来的过度活跃是离解速率常数的tetrahydrofolate enzyme-NADPH-tetrahydrofolate三元复杂。变体的晶体结构,解决和改进的R因子0.205 1.9埃分辨率,表明增加结构变体的灵活性和增加的大小N - (p-aminobenzoyl) -L-glutamate绑定裂引起的电离常数的增加。这是符合一个大压缩率(体积波动)的变体。比较野生型之间的折叠动力学和变异表明,这两种酶的折叠是相似,表明酶的活性增强可以达到没有折叠机制的翻天覆地的变化。