催化作用的分析Asp97蛋氨酸氨肽酶的大肠杆菌。
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催化作用的分析Asp97蛋氨酸氨肽酶的大肠杆菌。
2月j . 2008年12月,275 (24):6248 - 59。doi: 10.1111 / j.1742-4658.2008.06749.x。Epub 2008年11月13日。
- PubMed ID
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19019076 (在PubMed]
- 文摘
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一个活跃的站点天冬氨酸残基,Asp97,蛋氨酸氨基肽酶(metap)大肠杆菌(EcMetAP-I)突变为丙氨酸,谷氨酸和天冬酰胺。Asp97是孤独的羧酸盐残渣绑定到结晶学确定EcMetAP-I第二metal-binding网站。这些突变EcMetAP-I酶活动和光谱方法的特点。电感耦合等离子体原子发射光谱分析显示,1.0 + / - 0.1版的钴与每个相关Asp97-mutated EcMetAP-Is。影响活动后改变Asp97丙氨酸,谷氨酸或天冬酰胺,一般来说,由于减少大约9000倍k (ca)对Met-Gly-Met-Met比野生型酶。野生型的有限公司(2)d d光谱,D97E和D97A EcMetAP-I展出形式的差异非常小,在每种情况下,monocobalt之间(II)和dicobalt EcMetAP-I (II),观察和只有一倍的强度在添加第二个公司(II)离子。相比之下,电子吸收光谱(Co_ (D97N EcMetAP-I)]和[可可(D97N EcMetAP-I)]是截然不同的,EPR谱。观察到的摩尔吸光系数的基础上,公司(II)离子D97E绑定,D97A和D97N网站pentacoordinate EcMetAP-I活跃。结合这些数据表明,变异唯一nonbridging配体在第二个二价metal-binding网站MetAP丙氨酸,有效地消除了酶的能力形成一个双核的网站,提供了一个保留的MetAP酶催化活性,尽管在极低水平。虽然单核metap活跃,酶的生理相关的形式可能是双核的,考虑到大多数的数据报告日期符合弱合作绑定。