分子克隆、测序和基因编码的映射蛋白酶和蛋白酶的特性和proteinase-defective大肠杆菌突变体。
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松原Ichihara年代,Y,加藤C,赤坂K,水岛
分子克隆、测序和基因编码的映射蛋白酶和蛋白酶的特性和proteinase-defective大肠杆菌突变体。
J Bacteriol。1993年2月,175 (4):1032 - 7。
- PubMed ID
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8432696 (在PubMed]
- 文摘
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克隆携带基因编码一种蛋白酶分离从克拉克和碳的集合,使用一个显色底物,N-benzyloxycarbonyl-L-phenylalanine beta-naphthyl酯。三个克隆孤立,pLC6-33、pLC13-1 pLC36-46,共享相同的染色体DNA区域。0.9 kb Sau3AI片段在这个地区被发现负责蛋白酶的生产过剩,和该地区的核苷酸序列被确定。蛋白酶的纯化是同质性的高产菌株的可溶性部分拥有克隆的基因。纯化蛋白的n端氨基酸序列显示,克隆的基因结构基因的蛋白质,蛋白质是合成信号肽的前体形式。其分子质量的基础上(20 kDa),周质的定位、底物特异性,我们结束这种蛋白质被蛋白酶即利用基因克隆的质粒,构建缺失突变体的基因取代了卡那霉素抗性基因在染色体(Kmr)。Kmr基因映射在11.8分钟,dnaZ-adk-ush-Kmr-purE基因顺序,符合apeA的地图位置,我在鼠伤寒沙门氏菌的基因编码蛋白酶。因此,基因被任命为apeA。删除apeA基因,要么有或没有删除其他蛋白酶(第四蛋白酶和氨肽酶N),对细胞生长没有任何影响在各种媒体进行测试。