净化、属性和n端氨基酸序列的齐次大肠杆菌2-amino-3-ketobutyrate连接酶,吡哆醛phosphate-dependent酶。
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慕克吉JJ,德克EE
净化、属性和n端氨基酸序列的齐次大肠杆菌2-amino-3-ketobutyrate连接酶,吡哆醛phosphate-dependent酶。
J生物化学杂志。1987年10月25日,262 (30):14441 - 7。
- PubMed ID
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3117785 (在PubMed]
- 文摘
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从100克(湿重)大肠杆菌突变的k - 12被迫在苏氨酸为唯一碳源生长,我们开发了一个六步程序提供30 - 40毫克的齐次2-amino-3-ketobutyrate辅酶a连接酶(也称为氨基丙酮合成酶或合酶)。这个连接酶,催化裂解/ 2-amino-3-ketobutyrate之间的缩合反应(假定苏氨酸dehydrogenase-catalyzed反应的产物)和甘氨酸+乙酰辅酶a,表观分子量约等于85000,由两个相同的或几乎相同的子单元与奥= 42000。计算机的氨基酸组成分析数据,提供最适合每个残留最近的整数比,表明387氨基酸/单元计算= 42093先生。逐步埃德曼降解提供了第一个21个氨基酸的氨基端序列。是吡哆醛phosphate-dependent酶(a)以来几羰基试剂导致超过90%的损失的活动,(b)透析对缓冲区包含羟胺导致89%的损失的活动重合在428 nm吸收率,降低86%的酶蛋白(c)孵化20 microM磷酸吡哆醛显示并行恢复(大于90%)的活动和428 nm吸收率,降低和(d)的全酶NaBH4导致完全失活,消失的一个新的吸收最大值333海里。严格的特异性但乙酰辅酶a显示了甘氨酸(100%)、n-propionyl-CoA(127%)、或n-butyryl-CoA(16%)是利用缩合反应。明显的Km值乙酰辅酶a、n-propionyl-CoA和甘氨酸是59 microM, 80 microM,和12毫米,分别;最佳pH值= 7.5。添加二价金属离子或巯基化合物抑制缩合反应的催化作用。