lividans链霉菌家族12内切葡聚糖酶:催化cre的构建、表达和1.75 A分辨率的x射线结构。
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Sulzenbacher G, Shareck F, Morosoli R, Dupont C, Davies GJ
lividans链霉菌家族12内切葡聚糖酶:催化cre的构建、表达和1.75 A分辨率的x射线结构。
生物化学。1997十二月23;36(51):16032-9。
- PubMed ID
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9440876 (PubMed视图］
- 摘要
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纤维素酶是糖苷水解酶，负责植物结构聚合物纤维素的酶分解。它们与木聚糖酶一起抵消了自然界中植物生物量的无限积累，具有相当大的基础和生物技术价值。来自链霉菌的内切葡聚糖酶CelB水解纤维素的β -1,4-糖苷键，并保持异构结构的净保留。该酶是糖苷水解酶家族的一员12 [Henrissat, B.和Bairoch, a .(1996)生物化学。J. 316, 695-696]，以前避免了详细的结构分析。一种截断的，但具有催化活性的CelB，锁定了灵活的连接子区域和纤维素结合域，已被构建并在S. lividans表达系统中过表达。由此产生的催化结构域CelB2的三维x射线结构已经通过传统的多重同构替换方法求解，并在1.75 A分辨率下细化到R因子0.187。正如之前疏水聚类分析所预测的那样，该酶的整体折叠与家族11木聚糖酶的折叠具有显著的相似性[Torronen, a .， Kubicek, C.P，和Henrissat, B. (1993) FEBS Lett. 321, 135-139]。23kda蛋白质呈现果冻卷拓扑结构，主要由反平行β -薄片以三明治状方式排列而成。正如在其他内切葡聚糖酶结构中观察到的那样，一个深的底物结合裂缝贯穿其表面，并且有可能容纳多达五个结合子位点。 The likely catalytic nucleophile and Bronsted acid/base, residues Glu 120 and Glue 203, respectively, have their carboxylate groups separated by a distance of approximately 7.0 A and are located approximately 15 A from one end of the cleft, implying a -3 to +2 active site.