人芳香l -氨基酸脱羧酶基因神经元特异性启动子的鉴定。
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Le Van Thai A, Coste, Allen JM, Palmiter RD, Weber MJ
人芳香l -氨基酸脱羧酶基因神经元特异性启动子的鉴定。
《脑科学》1993年3月17日(3-4):227-38。
- PubMed ID
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8510497 (PubMed视图］
- 摘要
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我们克隆了人芳香族l -氨基酸脱羧酶(AADC)基因的5'区，并对前5个外显子进行了测序。一个61碱基对(bp)的非编码的第一个外显子包含在人嗜铬细胞瘤AADC cDNA的5'端，位于外显子2上游16kb，在该外显子中开始翻译。通过RNAse作图、引物延伸和逆转录pcr定位转录起始位点。在非常规盖位置之前，在-29位置安装了一个改进的TATA盒。通过与报告基因LacZ连接，在帽位点上游560 bp区域发现了一个强启动子，并在人成神经细胞瘤SK-N-BE和SK-N-BE- k2细胞中转染。使用一系列具有不同长度的5'侧翼区域的结构，已经在-560至-394，-244至-200和-147至-1区域定位了三个积极的调控元件。负调控因子分布在-9000 ~ -560和-394 ~ -316区域。令人惊讶的是，包含内含子1的全部或主要部分的结构是不活跃的，这表明在第一个内含子中存在消音，或不正确的剪接事件。在人胆碱能神经上皮瘤细胞MC-I-XC和三种AADC活性较高的非神经元细胞系(人胰腺癌细胞AsPC-1、大鼠胰岛素瘤细胞RINm5F和小鼠垂体前叶细胞AtT20)中不表达含有560bp 5'侧序列的构建物。这些数据表明我们已经确定了一个神经元特异性AADC启动子。 An extensive search for a second promoter responsible for AADC gene expression in non-neuronal cells only gave negative results.