更换蛋氨酸- 161与苏氨酸消除人类的主要副产品谷氨酸脱羧酶65 kda变体在大肠杆菌表达。
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桑托斯J,安东EA, Buslje厘米,瓦尔迪兹SN,维拉纽瓦半岛,西卡米,Iacono R,黑手党P, Poskus E, Ermacora先生
更换蛋氨酸- 161与苏氨酸消除人类的主要副产品谷氨酸脱羧酶65 kda变体在大肠杆菌表达。
学生物化学Biotechnol达成。2000年6月,31 (Pt 3): 205 - 12所示。
- PubMed ID
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10814590 (在PubMed]
- 文摘
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大多数胰岛素依赖型糖尿病患者gen-erate构象自身抗体的胰岛细胞65 kda变异人类谷氨酸脱羧酶(GAD65),和一些免疫化学测试1型糖尿病的早期检测依靠GAD65抗体(先后)评估使用正确折叠重组GAD65抗原。此外,预防性治疗基于耐受化GAD65政府可以在不久的将来。因此,存在一个强烈的兴趣简单和经济的声音这个抗原表达过程。几次生产、原生形式,在大肠杆菌野生型GAD65已经失败。然而,这种困难在我们实验室最近超越GAD65表达与硫氧还蛋白融合蛋白(瓦尔迪兹,Papouchado Ghiringhelli, Poskus和Ermacora(1997)欧元。j。246, 350 - 359]。在这个工作,一个新的GAD65混合基因是通过加入工程cDNA准备从人类和老鼠的组织。另外新基因被修改为人类GAD65最后代码一个氨基酸替换:- 161 - - >刺。这种变化阻碍的co-expression 48-kDa副产品从内部翻译网站。同时,第二个58-kDa副产品被认定为GAD65 c端蛋白水解片段与thioredoxin-M161T co-purifies GAD65。 The new GAD65 variant was expressed and easily purified, yielding an antigen that performed equally or better than wild-type GAD65 in the reference radiobinding assay for GADA. The procedure provides an inexpensive source of large amounts of fully active and immunochemically competent GAD65.