催化机理Zn2 +端依赖多元醇脱氢酶:动能比较羊肝山梨糖醇脱氢酶与野生型和Glu154 - - >半胱氨酸酵母木糖醇脱氢酶的形式。
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Klimacek M, Hellmer H, Nidetzky B
催化机理Zn2 +端依赖多元醇脱氢酶:动能比较羊肝山梨糖醇脱氢酶与野生型和Glu154 - - >半胱氨酸酵母木糖醇脱氢酶的形式。
j . 2007 6月15日,404 (3):421 - 9。
- PubMed ID
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17343568 (在PubMed]
- 文摘
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协调山梨糖醇、木糖醇脱氢酶的催化Zn2 +碳链脱氢酶/还原酶超家族涉及直接或water-mediated从谷氨酸残基相互作用,替代一个同源半胱氨酸配体在酵母醇脱氢酶和肝类型。Glu154木糖醇脱氢酶的酵母Galactocandida mastotermitis(称为GmXDH)是一个半胱氨酸残基突变(E154C)恢复这个替代。尽管他们变量Zn2 +内容(0.10 - -0.40原子/单元),纯化制剂E154C常数催化Zn2 +中心展出活动(kcat) 1.19 + / - -0.03 s(1),不需要外源Zn2 +活动或稳定。E154C保留0.019 + / - -0.003%和0.74 + / -0.03%的野生型催化效率(kcat / K(山梨糖醇)= 7800 + x / -700(1)(1))和kcat (= 161 + / 4 s(1))对NAD +端依赖山梨糖醇氧化分别为25摄氏度。pH值的kcat / K(山梨糖醇)E154C下降低于9.1 + / - -0.3的明显的pK,反映出pK约-1.9 + 1.7的转变为GmXDH酸碱单元与相应的配置文件和羊肝山梨糖醇脱氢酶(称为slSDH)。pK的配置文件决定的差异1水和2水溶剂相似和不同寻常的小三酶(约+ 0.2日志单位),这表明观察pK在二进制enzyme-NAD +复合物可能是由于Zn2 +绑定水。消除不同条件下pH-dependences,野生型和突变体GmXDH显示类似的小学和溶剂氘动力学同位素效应为1.7 + / - -0.2 (E154C, 1.7 + / - -0.1)和1.9 + / - -0.3 (E154C, 2.4 + / - -0.2)分别kcat / K(山梨糖醇)。瞬态动力学的研究减少NAD +和质子释放在slSDH山梨糖醇氧化的pH值8.2显示两个质子丢失速率常数为687 + / -12年代(1)在研究状态,这档节目的特点就是营业额为0.9 + / - -0.1酶等价物作为NADH产生速率常数为409 + / 3 s (1)。结果支持辅助Glu154参与催化,和质子转移在山梨糖醇、木糖醇脱氢酶的可能机制进行了讨论。