高层表达人类肝脏的单胺氧化酶pastoris:一个在毕赤酵母和酿酒酵母表达的酶相比。
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李米,Hubalek F, Newton-Vinson P,埃德蒙森DE
高层表达人类肝脏的单胺氧化酶pastoris:一个在毕赤酵母和酿酒酵母表达的酶相比。
蛋白质Expr Purif。2002年2月,24 (1):152 - 62。
- PubMed ID
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11812236 (在PubMed]
- 文摘
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高层次的表达、纯化和表征膜结合重组人类肝脏单胺氧化酶(是)在毕赤酵母属pastoris描述。两升的发酵培养生产1170台(660毫克)的是。酶纯化在35%的收益率,在变性凝胶电泳是均匀的,展示一个物种(60512 + / - 6 Da)在电喷雾质谱分析。它包含1摩尔的8 alpha-s-cysteinyl时尚/摩尔的酶和展品> 95%的功能。相比之下,酿酒cerevisiae-expressed酶部分处理c端丝氨酸去除质谱做了演示。的氨基末端p pastoris——美国cerevisiae-expressed是对氨基乙酰化蛋氨酸。的稳态动力学性质p pastoris-expressed是类似于美国cerevisiae-expressed是使用下面的底物:苯乙胺,p-CF(3)苄胺,多巴胺,5 -羟色胺,kynuramine。还原滴定表明,重组酶底物的减少1摩尔或按预期亚硫酸氢所需的两个电子等价物黄素的减少。吸收和电子顺磁共振光谱显示休息酶而不激进的物种形成阴离子黄素激进在50%的收益率与亚硫酸氢还原滴定。这些数据表明外源表达显著优势的人类相比,p . pastoris是酿酒酵母系统发表在较高的表达水平(329 mg / L)和更高层次的同质性的孤立的酶。